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Tris-HCl的优缺点对比

发布时间:2022-05-11   点击次数:411次

在生物制剂研发及生产过程中常会用到缓冲液,其作用是在有限的范围内调整溶液的pH值,使溶液的酸碱度符合制剂成分适宜的范围。

常用的缓冲液有很多,如磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、HEPES缓冲液、氨基酸缓冲液等。不同的缓冲液差别液很大,今天主要来对比两种常用的缓冲液:Tris-HCl缓冲液与HEPES缓冲液各自的优缺点。

一、Tris-HCl缓冲液与HEPES缓冲液优缺点对比



1、Tris-HCl缓冲液


Tris缓冲液是在生化研究及制剂生产中使用较广泛的一种缓冲剂,其本身为弱碱,常用有效pH在“中性"范围,如Tris-HCl缓冲液:pH=7.5~8.5;Tris-磷酸盐缓冲液:pH=5.0~9.0。


①Tris-HCl缓冲液优点

碱性较强,可以只用这一种缓冲液配置由酸到碱的范围pH缓冲液;对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。


②Tris-HCl缓冲液缺点

pH受浓度影响较大,稀释10倍,pH变化大于0.1。温度效应大,如4℃时pH=8.4,37℃时pH=7.4。



2、HEPES缓冲液


HEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH7.2~7.4范围内具有较好的缓冲能力,常用在体外诊断、DNA/RNA提取、脂质体药物等方面。


①HEPES缓冲液优点:

在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的pH值,并对细胞无毒性作用。


②HEPES缓冲液缺点:

在高浓度时对一些细胞可能有毒,与其他缓冲剂相比成本略高。

二、Tris-HCl缓冲液与HEPES缓冲液的应用



1、Tris-HCl缓冲液的应用


Tris常用于蛋白或者核酸的缓冲液,其在电泳缓冲液中与甘氨酸构成缓冲体系,稳定电泳过程中的pH,由于其具有弱碱性,水溶液的pH在10.5左右,可通过添加HCl或者NaOH制备不同pH的缓冲液,根据缓冲理论,Tris缓冲液的有效范围通常是pH 7.0-9.2之间。此外,Tris还可以制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物(磷霉素等)的中间物,在化妆品、医药、涂料以及合成中均有应用。应用于体内时,Tris作为一种不含钠的氨基缓冲碱,在体液中与H2CO3结合,生成碳酸氢盐。因此它能缓冲酸,而且能降低CO2张力,有纠正急性呼吸性酸中毒和代谢性酸中毒双重效果,其作用较碳酸氢钠快而强。


①Moderna核酸疫苗(mRNA-1273,pH7.0-8.0)

将SM-102、DSPC、胆固醇以及PEG脂质与溶于pH 5.0乙酸盐缓冲液中的mRNA以2.5:1(脂质:mRNA)的比例混合,再将混合物用Tris-HCl(pH=7.5)中和,加入蔗糖作为冷冻保护剂,最后将制备得到的溶液进行无菌过滤,-70℃下冷冻保存准备进一步使用。


处方:

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②恩利(注射用依那西普,Enbrel)

Enbrel是一个全人源的肿瘤坏死因子拮抗剂,是畅销的药物之一。

辅料:甘露醇,蔗糖,氨丁三醇(Tris)


2、HEPES缓冲液的应用


HEPES缓冲液对细胞无毒性作用,它是一种氢离子缓冲剂,能较长时间控制恒定的pH范围。使用时浓度为10-50mmol/L,一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。在体外诊断、DNA/RNA提取、脂质体药物等方面均有应用。


①Onivyde® -伊立替康脂质体

是一种拓扑异构酶抑制剂,与氟尿嘧啶和甲酰四氢叶酸组合,用于治疗基于吉西他滨治疗后疾病进展的胰腺转移性腺癌患者,为晚期大肠癌的一线用药,也可用于术后的辅助化疗;对肺癌、乳腺癌、胰腺癌等也有一定疗效。


处方:

12.png

Tris-HCl缓冲液与HEPES缓冲液都是生物制剂中常用的缓冲液,如何选择需要结合制剂本身的特性和处方优化的需求综合考量。






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