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HEPES缓冲对作为mRNA原液buffer的原因

发布时间:2023-09-06   点击次数:78次

2016年BioNTech发表LPX-mRNA制剂的文章中mRNA原液中所采用的buffer为HEPES。该研究中使用HEPES缓冲液配置1mg/ml的RNA原液,用于进一步制备RNA-LPX。
HEPES作为IVT反应体系buffer具有优势,这是我们结合相关文献,推断BioNTech采用HEPES缓冲对作为mRNA原液buffer的原因。
三、HEPES相较于其他缓冲体系较为突出的特点
1、pKa随温度变化非常小,buffer的pH值随温度漂移很小。
2、性质稳定,HEPES不会与其他离子发生相互作用,一方面HEPES不会与其他离子发生络合影响其他离子功能,另外一方面其他离子的存在不会影响HEPES的缓冲能力。
3、细胞培养基中pH的维持主要依靠培养基中的碳酸氢盐和5%的CO2共同维持,当细胞处于开放环境时,CO2逸散会导致pH快速上升脱离生理pH范围,而添加HEPES缓冲对的培养基则不存在这方面问题。
4、HEPES不易穿过生物膜,不干扰细胞内的生化反应。
四、使用HEPES缓冲体系时的注意事项
1、由于pai嗪基团的存在,当HEPES暴露于光线中时,会产生H2O2,这对培养的细胞或其它有生物活性的物体产生毒性,同时对氧化还原敏感的物质不宜共同使用,因此HEPES作为缓冲液的操作应尽量在避光条件下进行。
2、HEPES在生化领域常见的使用浓度为10-25mM,当浓度低于10mM时缓冲能力较弱,不能起到较好的缓冲效果,当浓度较高时对一些细胞可能具有毒害作用。
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