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注射级氨丁三醇缓冲液的优势及注意事项

发布时间:2022-04-11   点击次数:244次

生物缓冲剂在生物化学研究中有着重要的意义,在免疫印迹、生物芯片及生物杂交等实验及体外诊断、生物医药等行业中的应用非常广泛。

生物缓冲剂系统包含几十个品种。典型品种如注射级氨丁三醇、HEPES等。本文将介绍其中最常见的品种——注射级氨丁三醇缓冲剂的优点及使用注意事项。

 

一、简介:

注射级氨丁三醇是一种广泛应用于生物医药领域的缓冲盐,全称三(羟甲基)氨基甲烷,化学式C4H11NO3,白色结晶颗粒,CAS号:77-86-1,25°C下的pKa为8.06,常用于蛋白或核酸缓冲液,有效范围通常是pH 7.0-9.2之间。

注射级氨丁三醇被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长,注射级氨丁三醇也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一,其在电泳缓冲液中与甘氨酸构成缓冲体系,稳定电泳过程中的pH。此外Tris还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物,注射级氨丁三醇也被用作滴定标准物。

常见的注射级氨丁三醇缓冲液有Tris-HCl缓冲液、Tris-磷酸盐缓冲液以及多种衍生缓冲液,如TBS、TE等。

 

二、注射级氨丁三醇缓冲液优点如下:

1. Tris碱的碱性较强,所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液,应用范围广;

2. Tris缓冲液对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀;

3. Tris在水中溶解度高,对很多酶的反应是惰性的;

4. Tris缓冲能力高,在pH7.5-9.0之间有较强的缓冲能力;

5. Tris缓冲剂应用广泛,在生物化学、分子生物学、体外诊断、化妆品、涂料等领域发挥重要作用。

 

三、使用注射级氨丁三醇缓冲剂的注意事项:

1. Tris缓冲液的pH值受温度影响大,△pKa/℃=-0.031 ,例如:4℃时缓冲液的pH=8.4,则37℃时的pH=7.4,所以一定要在使用温度下进行配制,室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃~4℃。

2. Tris缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释十倍,pH值的变化大于0.1

3. Tris在一定程度上与各种分子反应,包括RNA酶抑制剂,醛,酶,DNA以及常见金属如Cr3+,Fe3+,Ni2+,Co2+和Cu2+等,在有些系统中会起抑制作用,在配制过程中需考虑与其他组分之间的相互作用;

4. Tris缓冲液易吸收空气中的CO2,配制的缓冲液要注意盖严密封;

5. Tris缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用,需使用与注射级氨丁三醇溶液具有兼容性的电极;

6. Tris缓冲液不适用于二喹啉甲酸(BCA)测定;

7. 吸入,摄入,皮肤吸收注射级氨丁三醇可造成伤害,操作时需戴好手套和护目镜;

8. 作为蛋白缓冲液时,若后续工作需要质谱,则不适宜用注射级氨丁三醇,最好换成其他质谱仪可耐受的缓冲液。

 

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