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HEPES作为IVT反应buffer的相关研究

更新时间:2023-09-12   点击次数:266次

mRNA原液中采用HEPES作为buffer可能与前一步RNA聚合酶体外转录密切相关。

早在1987年便有研究报道使用HEPES缓冲对用于体外转录,在该研究中考察了不同反应条件下IHNV(感染性造血坏死病毒)的 RNA 聚合酶的体外转录,研究结果表明对比Tris,使用HEPES缓冲液可以最大限度地提高体外转录(IVT)效率。


研究中对缓冲条件的研究表明,HEPES缓冲液刺激的RNA合成量比Tris缓冲液高三倍(图1 a),最佳浓度的HEPES缓冲液为400mM。
英国帝国理工大学医学院传染病系系主任Robin Shattock是mRNA预防性疫苗领域的专家,与BioNTech以及PNI等公司都有较为密切的合作。其团队2021年发表关于saRNA体外转录体系优化的文章中,考察筛选了影响saRNA体外转录的关键影响因素,最终确定了采用40mM浓度的HEPES作为IVT反应体系buffer,具有更优的体外转录效果。


2016年BioNTech发表LPX-mRNA制剂的文章中mRNA原液中所采用的buffer为HEPES。该研究中使用HEPES缓冲液配置1mg/ml的RNA原液,用于进一步制备RNA-LPX。

HEPES作为IVT反应体系buffer具有优势,这是我们结合相关文献,推断BioNTech采用HEPES缓冲对作为mRNA原液buffer的原因。

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